随着医学科学不断发展的需要，作为医学基础理论的病理学及其他许多学科对病理学研究的技术方法，目前得到更为广泛的应用，特别是近年来的免疫学、分子生物学技术与病理学技术相结合，使病理学新技术层出不穷，并已逐步开展与应用。

　　组织切片概述

　　组织制片技术的应用已有300多年的历史，最早应用冰冻切片;随后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成石蜡切片;后来用利用明胶、火胶棉、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制作切片。任何组织切片都必须依靠切片机将组织切成薄片(厚度以um计)。

　　制片方法的程序

　　1. 取材与固定 固定剂同时具有硬化细胞组织的作用，使制片便于进行。

　　2. 洗涤与脱水 洗涤是把深入组织中的固定剂洗去，防止染色中的结晶产生，驱除组织中的水分，利于透明和浸蜡。

　　3. 透明与浸蜡(透蜡) 脱水后的组织中水分已被透明剂所代替，而有利于浸蜡。浸蜡的目的是使组织有一定的硬度而有利于切片和细胞组织保持一定的生活时状态。

　　4. 包埋与切片 用石蜡和其他包埋剂(组织填充剂作包埋剂)包绕一定的形状以便于切片。将包埋好的组织块用切片机切成一定的厚度(厚度以um计)。

　　5. 贴片(展片、捞片)和染色 将已且妥的切片在温水中展平整后用载玻片贴上，稍晾干后再烤片。染色可使细胞和组织被染上不同的颜色而产生一定的折射率，便于显微镜观察。

　　6. 切片染色后用胶类物质将其封固，便于长期保存。

　　组织切片的主要程序

　　各种组织切片的目的各不相同，所以制作切片的方法程序也不同。

　　制片程序图

　　病理切片制备小技巧

　　在病理切片工作中，制备出合格优良的HE切片，是保证正确诊断的先决条件，在HE切片制作过程中，往往受到气候、切片材料、染色试剂及组织的特殊性等不同客观因素的影响而带来了不同的制片效果。一些小技巧可以改善制片质量。

　　1.利用自然人工物理方法改善难切组织块

　　在冬季或北方天气比较干燥，温度又较低时，做病理切片时比较难切，切的时候向组织块上呼几口热气，再切的时候切片会自然打卷，然后在温水里把切片展开，这样基本上就可以解决了。向做好的组织块上呼几口热气，目的主要是为了消除病理切片表面的静电。同时最好注意把切片机上的微米调薄一些，一般情况下调到2～3μm，但个别难切的组织(比如肺组织)还是得4～5μm。否则切出来的片子较厚，对淋巴组织观察不利。

　　2.选用经济适用的刀片

　　能否制做好组织切片，有一把优良的切片刀是非常关键的因素，应当选择刀刃宽，韧性强，刀口锋利，经济易得的手术刀片。曾某介绍应用22#手术刀片进行切片，累积30万张切片，取得的效果很好，且有成本低、更换刀片方便等优点。该类型号刀片可切胃镜活检、乳腺等组织20～30个蜡块，质量令人满意，且便携、易得，在价格上仅是进口一次性刀片的1/100，故是国内替代切片刀(12cm以上)和进口一次性刀片的理想刀具。

　　3. 特殊组织做好切片前处理

　　在日常病理切片工作中，如果肺组织标本不是很多，一般很少采用特殊的方法去处理这些标本。由于肺组织比较疏松，肺泡里含有空气，所以可以在固定、脱水、透明，以及浸透过程中加上负压去除空气，这对提高切片的质量有很大的帮助。肺组织好不好切跟其他组织一样，关键还是在固定与脱水，第一道低浓度酒精充分脱水是关键，但时间也不能过长，过长会使组织发脆。

　　4. 改进病理标本的固定

　　病理组织固定的目的主要是为防止组织的自溶和变质。临床常见的送检病理标本大都是标本大、容器小、固定液少，无法保证较好的组织固定。在常规取材后，将标本置于含10%福尔马林的65%～70%的乙醇溶液中进行再次固定，这种再次固定既有固定作用又有脱水作用，增强了组织硬度便于切成薄片，还能克服细胞核染色的发灰现象。

　　5. 选择好包埋用的熔点适宜石蜡和控制好温度

　　选用石蜡熔点为56℃～58℃较为合适，恒温箱的温度要求比石蜡熔点高2℃～4℃，其温度不宜过高，特别是在包埋时不能用火焰直接加热组织，这样易使组织变脆。包埋用蜡必须将使用过的陈旧石蜡和新蜡溶解混合后使用。这样可增强蜡块粘稠度，使组织切片连接更好。

　　6.应用超声波法或微波法快速制取切片

　　常规的石蜡切片法制取人体组织病理切片的步骤有取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、清洗、复水、染色、脱水、透明、封固等十五个步骤，其中前四个步骤固定、脱水、透明、浸蜡，每一步骤需花不少时间。例如用乙醇脱水一般要花4h，这样如果是特殊情况就不能满足临床要求。袁某等介绍应用超声波处理后快速制取的病理切片完全可与常规石蜡切片相媲美。将未经固定的新鲜组织(如皮肤、乳腺、胃、肠、淋巴结等)样品放入盛有不同处理液的玻璃烧杯中，然后用超声波进行快速处理，固定用30ml AF液(预配)处理3～4min，脱水用30ml无水乙醇(分析纯)处理3min，透明用30ml丙酮(分析纯)处理3min，浸蜡用30ml硬脂酸石蜡(预熔)处理3min，最快病理科在25min内可发出正确的病例报告。制备的切片面积大、切片薄、染色特别清晰，细胞收缩与室温石蜡切片无差别，且可同步处理多种不同样品，对快速制取骨组织切片特别有效。